Plataformas Científicas y Servicios
Expresión de proteínas
Introducción
La plataforma científica de expresión de proteínas del IRB Barcelona ofrece a la comunidad científica un amplio abanico de servicios de alto rendimiento (High Through-Put o HTP) de clonación y expresión proteica. La capacidad de estos métodos HTP para clonar y rastrear la expresión de un elevado número de constructos en paralelo proporciona una ayuda inestimable, ya que ofrece diferentes soluciones a problemas de expresión de proteínas. Esto se consigue incrementando rápidamente el número de variables disponibles para cada proyecto de investigación.
La plataforma ofrece actualmente los siguientes servicios:
Clonación HTP a medida para generar vectores de expresión
La plataforma es capaz de generar una placa de microtitración de 96 clones listos para expresar en un margen de una a dos semanas a partir de la recepción de las muestras (ADN molde y primers). Las placas pueden componerse de constructos con diferentes proteínas diana de un único organismo sometido a análisis (p. ej. para estudios de genómica estructural), o también con múltiples constructos de una proteína más compleja cuya expresión pueda resultar complicada y el investigador busque ampliar las opciones de expresión. Se pueden diseñar constructos con deleciones internas o en los extremos N o C-terminal de las proteínas, en combinación con un amplio espectro de proteínas de ‘fusión’ (por ejemplo, Maltose Binding Protein (MBP), Glutathione-S-Transferase (GST), o Small Ubiquitin-like Modifier (SUMO)), para incrementar el rendimiento de la expresión y la solubilidad de las proteínas de interés. Para generar los constructos de expresión se utiliza la técnica de clonación In-Fusion™ y la colección de vectores pOPIN1. Este sistema añade una cola His6 a todos los constructos para simplificar la detección de la expresión y la purificación de proteínas en paralelo.
Análisis de la expresión en E.coli
El screening de la expresión de los clones en E.coli puede llevarse a cabo en una semana aproximadamente, gracias al uso de placas de microtitración de 96 pozos (de la PECF o proporcionada por el propio usuario). Inicialmente incluye el uso de dos cepas de expresión, y el análisis de la expresión en cada cepa mediante el uso de IPTG la auto-inducción. En caso de necesidad pueden incorporarse otras cepas (DE3) de E.coli al screening.
Análisis de la expresión en células de mamífero
El screening de la expresión de los clones en células de mamífero (por ejemplo células HEK293) podrá llevarse a cabo en una o dos semanas, gracias al uso de placas de microtitración de 96 pozos (de la PECF o proporcionada por el propio usuario). Este servicio estará disponible durante el primer trimestre de 2009.
Durante el año 2009 van a ser introducidos otros servicios, entre los cuales destacan: expresión recombinante en baculovirus, screening de expresión en células Sf9, construcción de vectores a medida y la posibilidad de expresar en P. pastoris o en K. Lactis.
Para recibir más información sobre la plataforma científica enviar un email a:
nick.berrow
irbbarcelona.org
1 El vector pOPIN se desarrolló en la Oxford Protein Production Facility. Para más información ver también: Berrow NS, Alderton D, Sainsbury S, Nettleship J, Assenberg R, Rahman N, Stuart DI and Owens RJ. A versatile ligation-independent cloning method suitable for high-throughput expression screening applications. Nucleic Acids Res, 35, e45 (2007).
In-Fusion™ es una marca registrada de Clontech Laboratories, Inc.
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